Новые антирекорды спайк-белка: сохраняется 3.5 года в теле

Описание случая: Мы сообщаем о 55-летнем мужчине, который получил три дозы мРНК-вакцины Pfizer-BioNTech против COVID-19 и впоследствии развил прогрессирующую дисфункцию нескольких органов, соответствующую пост-COVID-19 вакцинному синдрому (PCVS), затрагивающую сердечно-лёгочные, неврологические, опорно-двигательные, желудочно-кишечные, автономные, отоларингологические, аудиовестибулярные, иммунные, офтальмологические, дерматологические и психиатрические домены.

Клинические проявления включали: лёгочные эмболы; отсроченный подтверждённый МРТ миокардит; нейрокогнитивные нарушения; мелковолокнистой невропатии; вегетативная дисфункция; миалгия; хроническое воздействие поджелудочной железы и желудочно-кишечного тракта; усугублял тиннитус с сенсоневральной потерей слуха; голосовая дисфагия и дисфония; офтальмологические нарушения; хроническое дерматологическое воспаление; и тревожность/депрессия. Случай был оценён с помощью уникально обширного продольного многодоменного клинического исследования, охватывающего молекулярные, иммунологические, генетические, протеомные, транскриптомные и тканевые анализы, проведённые для характеристики механизмов заболевания и исключения альтернативных этиологий.

Диагностическая оценка: После >40 визитов в отделение неотложной помощи и >200 амбулаторных специализированных консультаций пациент прошёл >100 нерутинных лабораторных обследований и >100 визуализационных и функциональных исследований. В ходе этой оценки систематически были исключены этиологические механизмы в инфекционных, аутоиммунных, ревматологических, эндокринных, генетических, гематологических, злокачественных, токсичных/медикаментозно-медикаментозных, сердечно-сосудистых, метаболических и первичных неврологических областях. Тестирование оставалось в основном недиагностическим.

После постановки диагноза миокардита и проведения серологии была заподозрена возможная недокументированная/недиагностированная бессимптомная инфекция, проявляющаяся как Long COVID; Неожиданные результаты побудили расширенные иммунные и тканевые тесты на компоненты, полученные из шипов и вакцин. Антитела к нуклеокапсидам SARS-CoV-2 были отрицательными в течение пяти отдельных временных периодов в течение 809–1 433 дней после вакцинации, что подтвердили три независимые лаборатории. Пациент остаётся отрицательным на нуклеокапсид с устойчиво повышенным уровнем антител к спайкам (4 553 U/mL) через 1 433 дня после финальной вакцинации.

Сбор образцов и аналитические методы: Образцы крови и кожной ткани были получены в несколько периодов времени в период от 852 до 1 364 дней после окончательной вакцинации Pfizer-BioNTech на COVID-19 мРНК. Анализируемые биологические компартменты включали плазму, циркулирующие экзосомы, периферические мононуклеарные клетки крови (PBMC) и кожную ткань. Образцы оценивались в нескольких независимых лабораториях с использованием различных аналитических методов, включая ELISA, автоматизированную иммуногистохимию, RT-PCR, стандартное ПЦР с подтверждением секвенирования Сэнгера, секвенирование целого генома, транскриптомическое профилирование и количественную масс-спектрометрию.

Циркулирующие молекулярные находки: Через 852 дня после вакцинации иммунное тестирование на основе крови выявило обнаруживаемый белок SARS-CoV-2 S1 в классических и неклассических подгруппах моноцитов с ассоциированными отклонениями цитокинов и иммунных маркеров. Через 1 173 дня после вакцинации ELI с высокой чувствительностьюSA обнаружил свободный уханьский шиповый белок в плазме (129,0 +- 4,1 fg/mL) и в циркулирующих экзосомах (11,6 +- 0,1 fg/mL).

Через 1 284 дня RT-PCR выявило вакцинно-полученную шиповую мРНК в циркулирующих экзосомах, тогда как PBMC РНК осталась отрицательной после экстракции, обработанной ДНКазой, и ампликон-специфической ПЦР, направленной на три спайковых области ORF (S1-S3). Серологическое профилирование через 1 173 и 1 284 дня после вакцинации показало устойчиво повышенные концентрации IgG4, специфические для спайков, (354,4 +- 22,4 нг/мл и 320,2 +- 4,4 нг/мл соответственно), что соответствует продолжающейся антигенной стимуляции и иммуннотолерантному ответу.

Тканевые молекулярные и гистопатологические данные: Серийные биопсии кожи на 1 160, 1 249 и 1 364 дня после вакцинации, все с участковой кожи в областях клинически активной болезни Гровера, были отрицательными на нуклеокапсид и продемонстрировали устойчивое отложение шиповых белков в эндотелиальных клетках и макрофагах с помощью автоматизированной иммуногистохимии с гистопатологической корреляцией.

Спайк-белок также был обнаружен в нервных волокнах через 1364 дня. Биопсия кожи за 1364 дня содержала несколько элементов плазмидной ДНК, включая последовательности спайк-гена (S1-S3), ori1/ori2 и энхансер SV40, что подтверждало устойчивое сохранение ДНК, полученной из вакцины, в соматической ткани путём амплификации ПЦР с помощью агарозного геля электрофореза и секвенирования Сэнгера.

Мультиомный анализ: Анализ структурных вариантов с секвенированием целого генома через 1 277 дней после вакцинации выявил широко распространённую геномную нестабильность, с крупными дупликациями и делециями, затрагивающими EGFR, MYC, ERBB2 и ETV6/RUNX1, тогда как сравнение РНК-ДНК показало варианты только с РНК в рибосомальных, NMD, малых РНК, эпигенетических и TP53 путях.

Транскриптомическое профилирование цельной крови выявило окислительный стресс, сосудистую активацию и хрупкость ядер. Протеомика мочи с количественной масс-спектрометрией подтвердила системное воспаление с гиперактивацией комплемента (CFH), редокс-дисбаланс (PRDX1) и устойчивые ответы антител, поддерживаемые рисковыми аллелями HLA-B07:02 и DRB1*11:04.

Заключение: Этот случай документирует самое длительное сообщаемое in vivo сохранение мРНК, фрагментов плазмидной ДНК и спайк-белка после вакцинации мРНК, при этом воспроизводимое обнаружение в нескольких независимых лабораториях, отдельных биологических компартментах и дополнительных молекулярных системах обнаружения, продолжающееся более 3,5 лет после последней дозы.

Были выявлены спайк-белки, последовательности мРНК спайков и элементы плазмидного хребта как в иммунных клетках, так и в соматической ткани, при сохранении белка или антител нуклеокапсидов SARS-CoV-2, что фактически исключало предшествующую инфекцию в качестве источника. Совпадение этих наблюдений при продольном отборе продольных образцов крови и тканей дает прямое доказательство того, что генетический материал, полученный из мРНК-вакцины, и его транслируемые белковые продукты могут сохраняться in vivo в течение многих лет после введения.

Параллельно мультиомные анализы выявили устойчивую геномную нестабильность и транскриптомическую дисрегуляцию более чем через 3,5 года после вакцинации, что свидетельствует о том, что устойчивый материал, полученный из вакцины, может быть связан с долгосрочными изменениями геномных и молекулярных путей хозяина. Эти данные оспаривают распространённые предположения о быстрой деградации и кратковременной биологической активности компонентов мРНК-вакцины и подчёркивают необходимость контролируемых лонгитюдных исследований для определения распространённости, механизмов и clИнические последствия устойчивого материала, полученного из вакцин.